叶酸受体α（FRα）通常表达在肾近端小管以及脉络丛等区域中，但FRα几种上皮肿瘤中经常高度表达，包括乳腺癌（BC）和卵巢癌（OC）。KimberlyR等人的前期实验已经证明相对于未患有BC或OC女性患者，BC和OC妇女有较高水平的T细胞以及FRα抗体。重要的是，不管在病例或对照组中，FRα的自发免疫与副肿瘤综合征或其他自身免疫症状均无相关性。因此把FRα作为BC和OC患者的候选治疗性疫苗抗原。在BC和OC患者中，从FRα序列中鉴定出5种的可以诱发T细胞免疫应答的HLAII类结合肽。88％的女性会表达可识别至少一种肽的HLA蛋白，从而使大多数未经选择的HLA多样化患者有可能对疫苗作出反应。基于前期研究，KimberlyR等人在年3月于ClinicalCancerResearch发表了一项I期临床试验研究，该研究纳入22个患者的I期临床试验研究以评估由FR30，FR56，FR76，FR和FR与GM-CSF混合组成的多表位FRα疫苗的免疫原性和安全性特征。
实验对象纳入标准是至少90天前已完成治疗（手术，化疗，放疗或联合治疗）并且在治疗后未显示疾病迹象的卵巢癌，原发性腹膜癌或乳腺癌患者。产生有效抗肿瘤免疫力的最大障碍是调节性T细胞（Tregs）介导的局部和全身肿瘤诱导的免疫抑制。抑制免疫抑制酶（IDO），表面标志物（PD-L1，CTLA-4）和Tregs（DenileukinDiftitox，环磷酰胺）等几种策略是否能改善对疫苗的反应已经或正在进行试验。在这项试验中患者最初用低剂量环磷酰胺（CTX）治疗，然后每月接种6次，接种疫苗期间和长达一年后检查免疫力和安全性为主要目标。
该实验纳入了22名女性患者接受了治疗。14例患者被诊断为卵巢癌，8例患有乳腺癌。四名卵巢癌患者在入选研究时有复发性疾病。无论FRα基线水平如何，患者均被纳入。8位乳腺癌患者均被诊断患有ER+PR+HER2/neu-癌症，该表型在乳腺癌的患者群体中的发生高频率。实验结果显示：
毒性的评估
接种疫苗耐受性良好，与≥3级显着毒性无相关性。其中一名患者发生了与治疗相关的3级注射部位反应。接种阶段观察到的2级反应包括淋巴细胞减少症（3名），疲劳（3名），嗜中性白血球减少症（2名），白细胞减少症（2名）和注射部位反应（2名）。两名患者在CTX治疗期间发生3-4级感染，这与治疗无关。在整个免疫接种时间表中，对自身免疫（类风湿因子，抗核抗体和促甲状腺激素）的试验显示参与者没有任何升高。
循环中的Tregs
在17名可评估的患者中比较来自治疗前和CTX后血液样品的Treg发生频率。在用CTX之前，Tregs的平均占比为总淋巴细胞群的0.6±0.1％CTX治疗后，平均为0.7±0.1％，与平均治疗前水平无显着差异（P=0.16）。与之前的研究相比，在没有疾病迹象的患者群中，相对于在12名正常健康女性中观察到的水平，Treg没有显着升高（正常值为±13％，p=0.2）。
接种后产生T细胞
对FR30的免疫IFN-γ产生的T细胞细胞为47±14（n=14）/百万PBMCs（外周单核细胞），其增加至±14（p=0.）。对于FR56，T细胞从52±13增加到±52（p=0.），FR76从43±14增加到±55（p=0.），从FR增加到27±11到±68（p=0.），FR从33±8到±37（p=0.）。
FR30平均抗体浓度为7.0±2.3μg/ml（n=21），增加至9.1±2.4至10μg/ml（p=0.53）。对于FR56，平均抗体从5.1±1增加到6.7±1.0（p=0.26），从FRK76从3.8±1.0增加到4.9±1.3（p=0.5），FR从2.3±0.6增加到2.8±68（p=0.28）和FR从3.1±1.6到5.9±1.8（p=0.88）。这些轻微的非显着性增加并未导致可以结合整个FRα蛋白的抗体的增加（5.3±1.6至5.9±1.8ng/ml，p=0.8）。
另外疫苗接种过程中的每个单独时间点检查了T细胞，从而能够分析疫苗期间的最大免疫持续时间，估计FR30最长免疫时间为5个月，FR56为7个月，FR76为5个月，FR为5个月，FR为7个月，有效疫苗的关键标志之一是产生持久免疫力以预防疾病的能力。为了确定是否实现了免疫记忆，开始接种疫苗后10,13和18个月（观察期）收集并分析血液标本。结果显示，FRα肽特异性在观察期间表现出高而稳定的免疫记忆。该分析中的所有患者对疫苗具有T细胞应答的响应，其中大多数（17/19）患者对多个表位作出反应。最后还实验了T细胞对疫苗肽的反应似乎与原发肿瘤中的FRα阳性或阴性无明显相关（FR30，p=0.36;FR56，p=0.31;FR76，p=0.73;FR，p=0.69;FR，p=0.82）。
临床结局
虽然该试验的目的不是为了评估临床结果，但所有患者在最后一次随访中仍然活存活，至少在接种开始后两年。首次缓解的OC患者的无复发生存期中位数为天，而二次缓解期OC患者和BC患者的中位生存期未达到。
这个使用多表位FRα肽疫苗的I期临床试验中大多数患者对5种肽中至少3种产生应答，导致产生能够识别天然加工抗原的免疫力。然而，尽管已经确定了一个临界值，但值得注意的是它是一个任意的临界值，因为目前无法知道抗原特异性T细胞需要多少水平才能保护疾病。目前尚不知道指导FRα的细胞和体液免疫应答对于功效是否是必需的。在某些情况下（例如HER2/neu阳性乳腺癌），抗体反应似乎有帮助。T细胞应答在接种过程中缓慢发展，中位时间至5个月时达到最大免疫力。尽管免疫力发展缓慢，但反应性似乎持续至少12个月。
总之，这种首次在人体内进行的I期研究在CTX激发后靶向FRα的多肽疫苗显示出极小的不良反应并且没有严重的未预料到的毒性。预计疫苗诱导的抗肿瘤免疫的临床效果不易从数据中推导出来，但支持疫苗的持续开发，可能是作为预防复发的手段或与免疫检查点封锁结合使用。
（作者：刘贵芬编辑：林海锋指导：孙蓬明）
参考文献：
KalliKR,BlockMS,KasiPM,etal.FolateReceptorAlphaPeptideVaccinegeneratesimmunityinBreastandOvarianCancerPatients.ClinCancerRes.Mar15.[Epubaheadofprint]
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